BNCC菌種測序名錄-中昌國研標物
細胞分選技術(shù)有新突破啦!
細胞培養也叫細胞克隆技術(shù),在生物學(xué)中的正規名詞為細胞培養技術(shù)。不論對于整個(gè)生物工程技術(shù),還是其中之一的生物克隆技術(shù)來(lái)說(shuō),細胞培養都是一個(gè)*的過(guò)程,細胞培養本身就是細胞的大規??寺?。但在細胞培養過(guò)程中也難免遇到這樣那樣的問(wèn)題,就比如常見(jiàn)的細胞密度不均勻問(wèn)題就很令人頭疼,那又該怎么辦呢?
下面便是小編為大家整理的幾點(diǎn)關(guān)于細胞分布不均的實(shí)用經(jīng)驗:
1、盡量消化細胞分散成單細胞懸液。對于易于消化的細胞,DPBS清洗一遍,加0.5ml胰酶潤洗一遍(25cm2培養瓶或6孔板),棄掉胰酶,37度消化2-3分鐘或室溫消化5min左右,鏡下觀(guān)察是否細胞消化較為分散。如果不夠,延長(cháng)消化時(shí)間。
2、96孔板一般以100 微升每孔接種,直接用100 微升移液器吸取細胞懸液,沿孔壁(稍離開(kāi)一點(diǎn)孔底即可,不要離底太高)直接接入,移液器不需*打到大,輕輕按下即可,每鋪完一行換一次槍頭同時(shí)輕輕混勻細胞懸液。都加完后蓋上蓋子,左手輕輕扶住板的左邊,右手輕輕敲擊板的右邊緣,注意把握力度(一般輕巧敲三下),太強或次數太多會(huì )導致細胞集中成堆,將板順時(shí)針旋轉(逆時(shí)針效果不好),依次敲擊剩余三個(gè)邊,靜置約5分鐘,放入37度培養箱。
3、6孔板、12孔板或24孔板,可采用將每個(gè)孔加入少量無(wú)血清培養基,晃動(dòng)浸潤整個(gè)孔底,然后用移液槍吸至第二孔,同樣方法浸潤孔底,其它孔依此類(lèi)推,這樣整個(gè)孔底都是濕潤的,細胞懸液會(huì )平鋪在整個(gè)孔底,注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下。這個(gè)方法就是有點(diǎn)慢,但操作熟練了也不慢。也可以采用輕拍的方式,但力度沒(méi)有96孔板好掌握,效果沒(méi)有96孔板好。
4、培養瓶里面加好細胞以后(比如傳代好/分好細胞以后),先順時(shí)針搖晃3次,馬上逆時(shí)針搖晃3次。然后延X(jué)軸Y軸分別水平搖動(dòng)3次。放入CO2培養箱后,平放著(zhù)培養瓶重復延X(jué)軸Y軸分別水平搖動(dòng)3次。