細胞解凍和培養指南

凍存的ATCC細胞株和雜交瘤細胞株在運送過(guò)程中使用干冰保持低溫。收到凍存細胞后，可以立即解凍復蘇，去除二甲基亞砜（DMSO）后進(jìn)行細胞培養。如果不立即復蘇培養細胞，必須將細胞凍存管放置于液氮罐氣相層存儲。請不要將細胞存儲在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低，達不到-130℃，細胞活力會(huì )迅速下降。

操作推薦

ATCC推薦在操作凍存的ATCC細胞株時(shí)使用手套，工作服和防護面具以避免任何事故發(fā)生。

檢查包裝，查看是否有任何破裂或滲漏。凍存的ATCC細胞株應處于固體狀。

將凍存的ATCC細胞株從有干冰的包裝中取出，立即復蘇培養，或迅速轉移放置在液氮罐氣相層在-130℃以下的溫度存儲。

凍存細胞的復蘇和培養

1、先準備好細胞培養皿或細胞培養瓶，及產(chǎn)品說(shuō)明推薦的相應細胞培養基。并在37℃水浴中預先溫熱細胞培養基。（請參閱：注1）

2、小心取出裝有細胞的凍存管，保持管蓋擰緊，將凍存管蓋以下的部分置于37℃水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍。解凍過(guò)程應該盡快，大約短于2分鐘或待后一塊小冰晶體剛融化，就應將細胞凍存管取出水浴。

3、在水浴中取出的細胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑，用無(wú)菌紙巾或紗布拭干。之后的操作步驟都應該遵循在無(wú)菌條件下生物安全柜中嚴格操作。

4、小心擰開(kāi)凍存管的頂部，將管內容物用1ml移液槍轉移到含9毫升培養基的無(wú)菌離心管中。離心5到7分鐘（125xg），小心吸去上清液以去除抗凍劑（二甲基亞砜），避免丟失細胞沉淀。將細胞沉淀重懸于配好的*培養基中。將細胞懸液轉移到培養容器，輕輕搖晃使細胞均勻的分布。生長(cháng)較慢的細胞株可重懸于5-8ml培養基并轉移到T25培養瓶。生長(cháng)較快的細胞株可重懸于12-20ml培養基并轉移到T75培養瓶。

5、將細胞培養容器置于細胞培養箱，在溫度37℃，二氧化碳濃度5%的培養條件下進(jìn)行孵育。細胞培養24小時(shí)后應在顯微鏡下觀(guān)察細胞形態(tài)和生長(cháng)狀況。（請參閱：注2）

*注1：雖然大多數細胞株可以在一種以上的培養基中生長(cháng)，但細胞的特征有可能會(huì )在更換不同培養基時(shí)發(fā)生。為保證好的效果，請從細胞培養一開(kāi)始就使用ATCC推薦的培養基。

*注2：某些細胞株，如雜交瘤株，可能需要幾天的時(shí)間才從凍存狀態(tài)下*恢復正常生長(cháng)。在細胞復蘇培養天可能會(huì )呈現較低的細胞活力并產(chǎn)生一些細胞碎片。度過(guò)這一時(shí)期后，細胞會(huì )恢復并進(jìn)入指數增長(cháng)期。

武漢中昌國研標物科技有限公司提示您：

細胞株的生長(cháng)有兩種狀態(tài)，貼壁細胞需要附著(zhù)在一個(gè)表面進(jìn)行生長(cháng)（貼壁依賴(lài)性），懸浮細胞可在懸浮培養狀態(tài)下生長(cháng)（非貼壁依賴(lài)）。在細胞單層貼壁生長(cháng)貨懸浮生長(cháng)中，都通常遵循四個(gè)特征性階段：遲滯期、對數或指數期、靜止或平臺期及衰退期。